EMB agar: nền tảng, chuẩn bị và sử dụng
Môi trường EMB là môi trường nuôi cấy rắn chọn lọc và khác biệt được sử dụng để phân lập trực khuẩn Gram âm, chủ yếu từ họ Enterobacteriaceae và các trực khuẩn Gram âm không đòi hỏi khác. Nó cũng được biết đến bởi từ viết tắt EAM, có nghĩa là màu xanh eosin-methylene.
Môi trường này được tạo ra bởi Holt-Harris và Teague vào năm 1916. Nó chứa peptone, lactose, sucrose, dipotali phosphate, agar, eosin, xanh methylen và nước. Nó rất giống với agar MacConkey, đặc biệt là nếu agar EMB được sửa đổi bởi Levine được sử dụng, không chứa sucrose.
Trong thực tế, mỗi phòng thí nghiệm quyết định nếu nó hoạt động với cái này hay cái kia, vì chúng thực hiện cùng một chức năng, mặc dù về mặt sinh hóa chúng khác nhau.
Nó thậm chí còn thể hiện nhược điểm tương tự như môi trường thạch MacConkey cổ điển về mặt sản xuất tràn lan của chi Proteus. Do đó, để tránh hiện tượng này, nồng độ agar có thể tăng lên tới 5%.
Nền tảng
Chọn lọc
Môi trường EMB được chọn lọc một cách tinh tế vì nó có chứa thuốc nhuộm anilinic (eosin và xanh methylen), hoạt động như chất ức chế, ngăn chặn sự phát triển của hầu hết các vi khuẩn gram dương và một số trực khuẩn Gram âm đòi hỏi.
Tuy nhiên, môi trường thạch này có nhược điểm là một số vi khuẩn gram dương có thể chống lại sự hiện diện của các chất ức chế và phát triển thành các khuẩn lạc nhỏ, không màu, có dấu, chẳng hạn như Enterococcus faecalis và một số Staphylococcus .
Bạn cũng có thể phát triển một số loại men nhất định, chẳng hạn như phức hợp Candida albicans, sẽ cho các khuẩn lạc màu hồng rất nhỏ. Bao gồm, chlamydospores có thể được phát triển từ nấm men này nếu mẫu được gieo theo độ sâu.
Chênh lệch
Mặt khác, môi trường thạch EMB cũng là một môi trường khác biệt, vì các thuốc nhuộm này với nhau (eosin và xanh methylen) có đặc tính tạo thành kết tủa ở pH axit, do đó chúng đóng vai trò là chỉ số sản xuất của nó.
Do đó, vi khuẩn đường sữa hoặc đường sucrose lên men yếu tạo ra các khuẩn lạc màu tím trong vòng 24 đến 48 giờ. Ví dụ như các chi Klebsiella, Enterobacter và Serratia.
Những vi khuẩn lên men mạnh mẽ đường sữa, như Escherichia coli, hoặc sucrose, như Yersinia enteratioitica hoặc Proteus penneri, tạo thành kết tủa màu đen xanh, tạo ra ánh kim loại đặc trưng ở những loài này.
Cần lưu ý rằng nếu sử dụng môi trường levine EMB (không có sucrose), Yersinia enteratioitica và Proteus penneri sẽ tạo ra các khuẩn lạc rõ ràng.
Vi khuẩn không lên men đường sữa hoặc sucrose được nuôi dưỡng bởi sự hiện diện của peptones, cung cấp các axit amin và nitơ cần thiết cho sự phát triển của vi khuẩn và tạo ra các khuẩn lạc rõ ràng. Ví dụ, chi Salmonella và Shigella, trong số những người khác.
Tương tự như vậy, điều quan trọng cần lưu ý là chi Acinetobacter có thể tạo ra các khuẩn lạc màu xanh hoa oải hương, mặc dù nó không phải là chất lên men của đường sữa, cũng không phải là sucrose, nhưng chúng có đặc tính cố định màu xanh metylen trong thành tế bào của nó. Điều này cũng có thể xảy ra với các vi khuẩn oxy hóa khác.
Chuẩn bị
Môi trường mất nước ban đầu là màu be nhạt.
Để chuẩn bị môi trường nuôi cấy này, 36 gram môi trường khử nước phải được cân và treo trong lọ chứa một lít nước cất.
Sau khi để hỗn hợp trong 5 phút khi nghỉ ngơi, đưa fiola vào nguồn nhiệt, trộn mạnh và liên tục cho đến khi nó sôi và nó được hòa tan hoàn toàn.
Sau đó, môi trường nuôi cấy đã được hòa tan phải được khử trùng bằng nồi hấp ở 121 ° C trong 15 phút.
Vào cuối thời gian, nó được gỡ bỏ khỏi nồi hấp và để lại một thời gian ngắn. Sau đó, nó được phục vụ thậm chí nóng (45 - 50 ° C) trong khoảng 15 đến 20 ml agar trong mỗi đĩa petri vô trùng. Các phương tiện nên có màu xanh quỳ.
Sau khi phục vụ các đĩa được để lại một chút cho đến khi agar nguội đi một chút. Sau đó, chúng được bảo hiểm và cho phép kiên cố hóa hoàn toàn. Sau đó, chúng được đặt trong một tấm giữ ngược và được bảo quản trong tủ lạnh (8 ° C) cho đến khi sử dụng.
Quy trình này tốt nhất là được thực hiện trong tủ hút dòng chảy hoặc ở phía trước đầu đốt Bunsen để tránh nhiễm bẩn.
Điều quan trọng cần lưu ý là mỗi nhà thương mại sẽ chỉ ra số lượng cần cân để chuẩn bị môi trường nuôi cấy.
Độ pH cuối cùng của môi trường phải là 7, 2 ± 0, 2
Công dụng
Môi trường này được sử dụng để gieo nước tiểu và phân hoặc bất kỳ loại mẫu lâm sàng nào, đặc biệt là nếu nghi ngờ có trực khuẩn Gram âm không đòi hỏi, chẳng hạn như trực khuẩn thuộc họ Enterobacteriaceae, phát triển rất tốt trong môi trường này.
Các vi khuẩn gây bệnh đường ruột của chi Shigella và Salmonella được phân biệt bởi các khuẩn lạc không màu hoặc hơi hổ phách.
Các trực khuẩn Lactose không lên men khác cũng phát triển, chẳng hạn như Aeromonas, Pseudomonas, Acinetobacter, trong số những người khác.
Tương tự như vậy, môi trường này rất hữu ích trong phân tích vi sinh thực phẩm và nước, vì nó lý tưởng cho giai đoạn xác nhận hoàn toàn xác định coliforms, nghĩa là, chứng thực sự hiện diện của E. coli từ nước dùng EC đục, từ của kỹ thuật số có thể xảy ra nhất (NMP).
Kiểm soát chất lượng
Để xác minh rằng môi trường nuôi cấy mới được chuẩn bị hoạt động tốt, các chủng đối chứng có thể được trồng để quan sát các đặc tính của các khuẩn lạc và xác minh rằng chúng phù hợp như mong đợi.
Đối với điều này, các chủng ATCC hoặc các chủng E. coli, Enterobacter aerogenes, Klebsiella sp, Salmonella typhimurium, Shigella flexneri, Pseudomonas aeruginosa và một số vi khuẩn gram dương, như S. aureus, có thể được sử dụng .
Người ta hy vọng rằng E. coli sẽ tạo ra các khuẩn lạc màu xanh đen phát triển tốt với ánh kim loại màu xanh lá cây. Trong khi đó, Enterobacter aerogenes và Klebsiella sp phải tạo ra các khuẩn lạc có màu đen hơi xanh phát triển tốt.
Mặt khác, Salmonella typhimurium và Shigella flexneri, phải phát triển các khuẩn lạc lớn, không màu hoặc có màu hổ phách nhẹ.
Cuối cùng, chi Pseudomonas aeruginosa phát triển thành những khuẩn lạc không màu có kích thước không đều, trong khi vi khuẩn gram dương nên bị ức chế hoàn toàn hoặc phát triển một cách tiết kiệm với những khuẩn lạc rất nhỏ.
Cân nhắc cuối cùng
Đôi khi việc khử trùng làm cho màu xanh metylen giảm, quan sát môi trường màu cam. Để màu xanh metylen bị oxy hóa và màu tím phục hồi, nó phải được trộn nhẹ nhàng cho đến khi màu phục hồi.
Ngoài ra, sau khi khử trùng, thuốc nhuộm có thể kết tủa, vì vậy nó phải được trộn đều trước khi phục vụ các món ăn Petri.
