Nước dùng Malonato: nền tảng, chuẩn bị và sử dụng

Môi trường malonate là môi trường nuôi cấy lỏng được sử dụng cho xét nghiệm chẩn đoán (xét nghiệm malonato), được sử dụng để phân biệt một số chi của họ Enterobacteriaceae. Nó được tạo ra bởi Leifson vào năm 1933 và sau đó được sửa đổi bởi Ewing, người đã thêm một lượng nhỏ dextrose và chiết xuất men vào công thức ban đầu.

Môi trường hiện tại bao gồm chiết xuất men, ammonium sulfate, dipotali phosphate, monopotali phosphate, natri clorua, natri malonate, dextrose và bromothymol màu xanh. Thử nghiệm này thường được bao gồm trong pin nhận dạng sinh hóa đối với Enterobacteria, giúp phân biệt các chi và loài nhất định.

Thử nghiệm malonate chủ yếu dựa vào khả năng của một số vi sinh vật sử dụng natri malonate làm nguồn carbon duy nhất và ammonium sulfate làm nguồn nitơ.

Xét nghiệm malonate thường dương tính ở một số loài thuộc chi Enterobacter, Klebsiella và Citrobacter. Trong khi, phần lớn các loài thuộc chi Escherichia, Salmonella, Shigella, Edwardsiella, Yersinia, Serratia, Morganella, Proteus và Providence, cho phản ứng tiêu cực.

Nền tảng

Thử nghiệm malonate bao gồm chứng minh những vi khuẩn có khả năng sử dụng natri malonate làm nguồn carbon duy nhất và ammonium sulfate làm nguồn nitơ.

Phần lớn vi khuẩn enterobacteria không sử dụng malonate có thể phát triển trong môi trường này, lấy chiết xuất từ dextrose và nấm men làm chất dinh dưỡng.

Trong trường hợp này, bất kỳ nỗ lực nào để kiềm hóa bằng cách sử dụng pepton sẽ bị phản tác dụng bởi việc sản xuất axit được tạo ra bởi quá trình lên men của dextrose. Tương tự như vậy, photphat kali và monopotosphat hoạt động như một chất đệm duy trì độ pH ở mức 6, 7.

Đó là lý do tại sao, khi thử nghiệm âm tính, nước dùng có cùng màu gốc (màu xanh lá cây). Trong một số ít trường hợp, môi trường có thể bị axit hóa do quá trình lên men của dextrose; không sử dụng pepton và chỉ thị pH sẽ chuyển màu của môi trường sang màu vàng. Để điều này xảy ra, độ pH phải giảm xuống còn 6.

Bây giờ, khi thử nghiệm này là dương tính, người ta nói rằng vi sinh vật đã sử dụng malonate và ammonium sulfate làm nguồn carbon và nitơ tương ứng, mà không sử dụng các thành phần khác.

Trong trường hợp này, môi trường trở nên kiềm do giải phóng natri và do đó hình thành NaOH. Theo nghĩa này, chỉ báo pH (bromothymol blue) chuyển màu từ xanh sang xanh khi pH bằng hoặc lớn hơn 7.6. Màu xanh có thể rõ ràng hoặc mãnh liệt (màu xanh Phổ).

Cuối cùng, natri clorua duy trì tính thẩm thấu của môi trường và nước là chất pha loãng của tất cả các thành phần.

Giải thích

Nước dùng cùng màu (màu xanh lá cây): thử nghiệm âm tính

Nước dùng màu vàng: xét nghiệm âm tính

Màu xanh nhạt hoặc nước dùng đậm: bằng chứng tích cực

Có một biến thể được gọi là phenylalanine malonate brothate, còn được gọi là Shaw và Clarke vừa. Trong trường hợp này, hai xét nghiệm có thể được phân tích, việc sử dụng malonate làm nguồn carbon và sản xuất axit pyruvic từ phenylalanine.

Chuẩn bị

Nước dùng Malonato

Lượng gram được chỉ định bởi phần chèn của nhà thương mại được chọn sẽ được cân (nó có thể thay đổi từ loại này sang loại khác). Gram nặng được đình chỉ trong một lít nước cất. Đun nhẹ cho đến khi tan hoàn toàn. Phân phối 3 ml môi trường trong 13/100 ống nghiệm có nắp bông.

Khử trùng trong nồi hấp ở 121 ° C trong 15 hoặc 20 phút.

Làm mát trước khi sử dụng. Nếu chúng sẽ không được sử dụng ngay lập tức, lưu trữ trong tủ lạnh cho đến khi sử dụng. Đun sôi nước dùng ở nhiệt độ phòng trước khi tiêm chúng.

Độ pH của môi trường nên là 6, 7 ± 0, 2. Màu của môi trường chuẩn bị là màu xanh lá cây.

Nước dùng malonate phenylalanine

Cân 11 g môi trường khử nước và hòa tan trong 1 lít nước cất. Phần còn lại của việc chuẩn bị giống như mô tả ở trên.

Nó cũng có thể được chuẩn bị bằng cách thêm 2 gr / L phenylalanine vào môi trường canh malonate trước khi khử trùng.

Sử dụng

Nó được sử dụng như một phần của pin của các xét nghiệm sinh hóa được lắp ráp để xác định vi khuẩn thuộc họ Enterobacteriaceae.

Giúp phân biệt giữa:

-Các chi Klebsiella và Enterobacter (+) của chi Escherichia và Serratia (-).

-Các loài Salmonella enterica ssp arizonae, Salmonella enterica ssp salame và Salmonella enterica ssp diarizonae (+), của loài Salmonella enterica ssp enterica (-).

-Từ chi Klebsiella nói chung (+) của chi Actinobacillus (-).

-Nó đôi khi có thể giúp phân biệt các chi và các loài vi khuẩn không thuộc họ Enterobacteriaceae, chẳng hạn như giữa trực khuẩn Gram âm không lên men Alcaligenes faecalis (+) và Acinetobacter sp (-).

Thủ tục

Dưới một cái bật lửa, một phần của thuộc địa nguyên chất được lấy, sử dụng tay cầm bằng bạch kim được khử trùng và làm mát đúng cách. Mẫu được lấy (inoculum nhẹ) được hòa tan trong môi trường malonate. Nó được ủ với nắp lỏng trong aerobiosis ở 35 ° C ± 0, 2 trong 24 đến 48 giờ.

Nước dùng malonate cũng có thể được tiêm từ môi trường nuôi cấy 18-24 giờ trong nước dùng đậu nành trypticase. Trong trường hợp này, 0, 01 ml được lấy bằng pipet vô trùng và nước dùng malonate được tiêm. Nó được ủ với nắp lỏng trong aerobiosis ở 35 ° C ± 0, 2 trong 24 đến 48 giờ.

Vào cuối thời gian kết quả được giải thích. Bất kỳ dấu vết nào của màu xanh lên đến đỉnh điểm sau 48 giờ ủ nên được coi là dương tính. Thử nghiệm không nên được hiểu là âm tính cho đến khi thời gian ủ 48 giờ đã hoàn thành.

Trong trường hợp sử dụng biến thể môi trường malonate phenylalanine, malonate được giải thích đầu tiên và sau đó 5 giọt HCL 1N và 3-5 giọt clorua sắt 8% được thêm vào. Một màu xanh đậm được hiểu là một thử nghiệm dương tính đối với phenylalanine. Mặt khác, nếu môi trường chuyển sang màu xanh nhạt, xét nghiệm âm tính với phenylalanine.

Kiểm soát chất lượng

Để thực hiện kiểm soát vô trùng môi trường, nên ủ một hoặc hai môi trường canh ở 35 ° C ± 0, 2 trong 24 giờ ủ. Vào cuối thời gian này không nên có độ đục, không thay đổi màu sắc.

Để kiểm soát chất lượng, có thể sử dụng các chủng đã biết hoặc đã được chứng nhận, như: Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 33945, Salmonella enterica ssp arizonae ATCC 13314 và Escherichia coli ATCC 25922.

Kết quả dự kiến là:

Enterobacter aerogenes, Klebsiella pneumoniae và Salmonella enterica ssp arizonae cho phản ứng dương tính (màu xanh trung bình).
Đối với Escherichia coli, kết quả phải âm tính, nghĩa là, người ta hy vọng rằng không có sự thay đổi về màu sắc (màu xanh lá cây) hoặc nó chuyển sang màu vàng do sự lên men của glucose.